免疫共沉淀（Co-IP）技術(shù)簡(jiǎn)介 Co-IP（免疫共沉淀）是生物醫(yī)學(xué)與基礎(chǔ)研究中常用的蛋白質(zhì)分析技術(shù)，基于抗原 - 抗體免疫結(jié)合原理，可富集體內(nèi)目標(biāo)蛋白及其互作復(fù)合體。 

根據(jù)目標(biāo)蛋白是否帶標(biāo)簽，Co-IP分為兩類： 1.  內(nèi)源性蛋白Co-IP：需使用IP級(jí)別抗體。 2.  標(biāo)簽蛋白Co-IP：適用于目的蛋白缺乏優(yōu)質(zhì)IP抗體或細(xì)胞內(nèi)本底表達(dá)量低的場(chǎng)景，需構(gòu)建過(guò)表達(dá)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染至細(xì)胞。

Co-IP核心應(yīng)用 

1.  驗(yàn)證已知蛋白-蛋白互作：免疫沉淀靶蛋白，確認(rèn)其與已知結(jié)合蛋白的相互作用關(guān)系。 

2.  分析蛋白質(zhì)復(fù)合物：結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)鑒定復(fù)合物組分及翻譯后修飾（PTM），解析復(fù)合物構(gòu)成與PTM功能。 

3.  探究PTM對(duì)蛋白互作的調(diào)控：針對(duì)甲基化、磷酸化等修飾的靶蛋白，分析修飾狀態(tài)對(duì)互作的影響及調(diào)控機(jī)制。

4.  助力藥物靶點(diǎn)篩選與療效評(píng)估：篩選疾病通路中潛在藥物靶點(diǎn)；檢測(cè)候選藥物對(duì)蛋白復(fù)合物互作的影響，評(píng)估藥物療效。

Co-IP實(shí)驗(yàn)操作流程 

1.  蛋白提?。毫呀饨M織/細(xì)胞，獲取目標(biāo)蛋白 

2.  Input制備：取裂解液制樣，驗(yàn)證目標(biāo)蛋白表達(dá) 

3.  免疫共沉淀：抗體磁珠捕獲目標(biāo)蛋白，形成復(fù)合物 

4.  洗滌：磁力架輔助，漂洗液去除未結(jié)合蛋白 

5.  煮脫：熱處理分離磁珠-蛋白抗體復(fù)合物 

6.  蛋白檢測(cè)：通過(guò)WB或質(zhì)譜分析驗(yàn)證結(jié)果 

PS：輝駿生物自有質(zhì)譜平臺(tái)，專業(yè)開(kāi)展IP、pull-down產(chǎn)物微量蛋白鑒定及生信分析。

Co-IP解讀Nature案例1

免疫共沉淀結(jié)果表明，在人源高分化肝癌細(xì)胞系中觀察到了PRMT1與FBXO7之間的相互作用。這一新發(fā)現(xiàn)揭示了一種可能存在的全新細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑，為深入探究細(xì)胞內(nèi)互動(dòng)關(guān)系提供了重要線索。

圖2 引自FBXO7 ubiquitinates PRMT1 to suppress serine synthesis and tumor growth in hepatocellular carcinoma. Nat Commun 15(1):4790(2024). 

Co-IP解讀Nature案例2

Co-IP解讀Nature案例3

通過(guò)在293T細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Flag-AATF全長(zhǎng)質(zhì)粒和不同截短體（檢測(cè)蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域），發(fā)現(xiàn)Flag-AATF全長(zhǎng)與XRCC4存在相互作用，進(jìn)一步驗(yàn)證Flag-AATF的哪一部分與XRCC4發(fā)生互作，就構(gòu)建了截短體，發(fā)現(xiàn)缺失331-380氨基酸片段時(shí)，XRCC4條帶消失，表明Flag-AATF的331-380為XRCC4互作靶點(diǎn)。這一關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域的明確，不僅為解析 AATF 與 XRCC4 互作的分子基礎(chǔ)提供了核心依據(jù)，更有助于深入探究二者協(xié)同參與的細(xì)胞生理或病理進(jìn)程，為后續(xù)相關(guān)機(jī)制研究和靶向策略開(kāi)發(fā)奠定了重要基礎(chǔ)。

IP 實(shí)驗(yàn)的一大痛點(diǎn)，就是抗體磁珠孵育洗脫后，WB 結(jié)果常出現(xiàn)抗體輕重鏈雜帶，既掩蓋目的條帶、干擾結(jié)果解讀，甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

輝駿生物標(biāo)簽納米抗體磁珠堪稱 “救星神器”：搭載羊駝源納米抗體，僅 15kD 單鏈結(jié)構(gòu)，無(wú)傳統(tǒng)抗體輕重鏈，從根源杜絕雜帶污染，讓 WB 條帶干凈清晰。同時(shí)它親和力優(yōu)異、用量少、成本低，助力 IP 實(shí)驗(yàn)高效完成。

圖 5 納米抗體磁珠無(wú)抗體輕重鏈的 IP 結(jié)果示意圖

Flag、HA、V5、GFP 等多種標(biāo)簽的納米抗體磁珠，以及配套 IP 試劑盒，輝駿生物均有供應(yīng)，迎隨時(shí)聯(lián)系！

PS:輝駿生物標(biāo)簽納米抗體磁珠結(jié)合量高，親和力強(qiáng)，無(wú)輕重鏈污染。

輝駿生物Co-IP客戶文章

客戶結(jié)果呈現(xiàn)：WB結(jié)果表明，使用輝駿生物的磁珠在樣品中獲得了單一清晰的靶蛋白條帶，且富集效率高，具備卓越的特異性 （Flag-GPX4與HA-OTUB1免疫共沉淀結(jié)果）

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