熒光素酶 (Luciferase)報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統(tǒng)。雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)指的是在同一細胞中同時表達兩種熒光素酶——螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，利用一個報告基因作為內參來校正另一個報告基因，從而減少細胞活性和轉染效率對實驗結果的影響。
雙熒光素酶報告基因可用于檢測啟動子活性，或者轉錄因子和啟動子的結合。
miRNA靶基因驗證技術原理
miRNAs常與靶基因的非翻譯區(qū)（常為3’UTR）結合，從而抑制整個mRNA的翻譯。將待測的miRNA結合位點序列（靶基因3‘UTR全長或結合位點附近500bp序列）構建到熒光素酶基因的下游，將該質粒與miRNA
mimics共轉染待測細胞；如果miRNA能夠結合待測序列，則會抑制上游熒光素酶表達，使熒光素酶底物發(fā)光減弱；根據化學發(fā)光值判斷miRNA是否與待測序列結合。
miRNA靶基因驗證應用范圍
1.miRNA與靶基因結合驗證
2.ceRNA機制研究：當加入競爭性的lncRNA或circRNA時，可以通過觀察Luciferase活性的變化判斷mRNA-miRNA-LncRNA（或circRNA）三者是否存在ceRNA調控機制。
miRNA靶基因驗證實驗技術流程
miRNA靶基因驗證技術服務*輝駿優(yōu)勢
化學發(fā)光法檢測，反應非常靈敏，可以有效的檢測體內微小的調控作用。
操作簡便，檢測結果直觀。
miRNA靶基因驗證服務信息
項目名稱 | 客戶提供 | 結果交付 | 實驗周期 |
| miRNA靶基因驗證 | 細胞樣本
實驗信息表（miRNA序列，3’UTR序列或靶點序列，細胞培養(yǎng)信息等）
| 報告基因載體（野生和突變型）
雙熒光素酶檢測結果
實驗報告
| 5-6周（不含細胞培養(yǎng)周期） |
| ceRNA研究 | 細胞樣本
實驗信息表（miRNA序列，3’UTR序列或靶點序列，lncRNA或circRNA序列，細胞培養(yǎng)信息等）
| 報告基因載體（野生和突變型）lncRNA或circRNA表達載體
雙熒光素酶檢測結果
實驗報告
| 5-6周（不含細胞培養(yǎng)周期） |
miRNA靶基因驗證實驗-客戶文章
【研究內容】：本研究發(fā)現miR-9在乳腺癌中上調，基因表達和雙熒光素酶實驗發(fā)現miR-9通過直接靶向編碼E-cadherin蛋白的mRNA“CDH1“來下調其表達，導致細胞運動性和侵襲性增加，進而激活β-catenin信號，導致VEGF表達的升高。同時，ChIP實驗發(fā)現MYC和MYCN可以結合miR-9-3在基因組中的位點從而激活miR-9。這些發(fā)現揭示了miR-9促進癌癥轉移的一個新的調控信號通路。
使用技術：雙熒光素酶（Luc）實驗、基因過表達/干擾檢測、ChIP技術服務
【研究內容】：本研究發(fā)現一種lncRNA“HOTIP“與小細胞肺癌（SCLC）的化療敏感性、癌細胞增殖和患者不良預后有關。通過miRNA芯片和雙熒光素酶確定了HOTIP可以結合miR-216a，之后又采用雙熒光素酶檢測、RNA
pull down
MS和RIP等實驗，確定了他們三者間的ceRNA調控機制：HOTIP通過結合miR-216a來減輕其對抗凋亡因子BCL-2的抑制作用。這些成果闡述了HOTIP在小細胞肺癌進展中的新作用。
使用技術：雙熒光素酶檢測服務、RNA pull down MS實驗
輝駿實力
實驗熱線：4006991663
