什么是流式細胞術(shù)？

流式細胞儀通過將細胞或顆粒分離到狹窄、快速流動的液體流中來檢測懸浮液中的細胞或顆粒。樣品通過激光，激光可檢測大小、顆?；蚣毎麛?shù)量、粒度和熒光等特性。   熒光標記，通常是熒光標記的抗體，通常用于流式細胞術(shù)實驗，可以提供有關(guān)細胞過程的信息，例如，細胞是活的還是死的。

熒光標記的樣本連接到流式細胞儀，并通過流體動力學聚焦定向成被快速移動的流體“鞘”包圍的細液體流。  一個激光（或多個激光）聚焦在該移動液體流上，檢測器瞄準檢測前向散射、側(cè)向散射和熒光分子的同一點。  結(jié)合來自粒子的熒光，檢測器識別散射光。

通過軟件檢測和分析熒光發(fā)射峰處的亮度波動，該軟件提供有關(guān)粒子特性的數(shù)據(jù)。  收集樣本數(shù)據(jù)被稱為“采集”，使用的軟件可以調(diào)整參數(shù)，例如通道之間的泄漏補償。  此外，該軟件可確保正確設(shè)置參數(shù)。   流式細胞儀的五個主要組件是流式細胞、測量系統(tǒng)、檢測器、放大系統(tǒng)和計算機軟件。

什么是蛋白質(zhì)工程？

蛋白質(zhì)工程用于合成新的蛋白質(zhì)，此外，可以修改（工程化）現(xiàn)有蛋白質(zhì)的序列和結(jié)構(gòu)以實現(xiàn)所需的功能。  蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域已顯著受益于分子力場、結(jié)構(gòu)生物信息學的進步以及對蛋白質(zhì)復雜 3D 結(jié)構(gòu)的了解不斷增加。  由于知識和技術(shù)的進步，計算方法已經(jīng)成為可能。

蛋白質(zhì)工程是一門相對較新的學科，在理解蛋白質(zhì)折疊和識別以告知蛋白質(zhì)設(shè)計原則方面已經(jīng)進行了大量研究。  蛋白質(zhì)工程策略分為兩類；  定向進化和合理的蛋白質(zhì)設(shè)計。   這兩種方法并不相互排斥，研究人員通常在蛋白質(zhì)工程中同時應(yīng)用這兩種方法。多蛋白質(zhì)工程方法包括多序列比對、協(xié)同進化分析、多價結(jié)合和結(jié)構(gòu)預測。

蛋白質(zhì)工程基于重組DNA技術(shù)。   經(jīng)典的合理設(shè)計方法涉及定點誘變，其中將特定的氨基酸序列插入靶基因。  可以使用位點重疊法或全質(zhì)粒單輪 PCR 進行定點誘變。   當?shù)鞍踪|(zhì)的序列已知時，合理設(shè)計是有用的。  然而，在許多情況下，序列是未知的，這促進了對進化方法的需求。

高通量篩選的最新技術(shù)進步為該領(lǐng)域的發(fā)展提供了機會。  流式細胞術(shù)是一種可以提供相關(guān)數(shù)據(jù)的技術(shù)，有助于為蛋白質(zhì)工程研究提供信息。

流式細胞儀如何用于檢測蛋白質(zhì)工程

近年來，流式細胞儀在蛋白質(zhì)工程中的應(yīng)用出現(xiàn)了巨大的機遇。 可以對蛋白質(zhì)進行工程改造，使其具有特定的特性，例如配體結(jié)合、變構(gòu)、催化活性和改進的穩(wěn)定性。  流式細胞術(shù)可以以高通量的方式檢測這些工程蛋白的生物標志物，每分鐘對數(shù)百甚至數(shù)千個顆粒進行分類和計數(shù)。

含有工程蛋白質(zhì)的細胞被熒光標記并通過流式細胞儀，在那里它們被軟件檢測和分析，通常需要多輪篩選才能找到具有目標功能特性的工程蛋白。執(zhí)行該多步驟過程，直到觀察到的蛋白質(zhì)功能改善可以忽略不計或生成的蛋白質(zhì)滿足所選標準。

有多種方法可以在工程蛋白中產(chǎn)生序列多樣性，包括隨機誘變、同源體外重組或非同源重組。 無論創(chuàng)建序列多樣性的方法如何，進化工程技術(shù)的主要障礙是傳統(tǒng)篩選過程對蛋白質(zhì)工程過程中產(chǎn)生的大量蛋白質(zhì)序列庫的限制。

流式細胞術(shù)在蛋白質(zhì)工程方面具有巨大優(yōu)勢，因為它能夠快速檢測工程細胞中表達的序列，為研究人員提供大量數(shù)據(jù)，為選擇具有感興趣特性的蛋白質(zhì)提供信息。蛋白質(zhì)工程中采用的其他技術(shù)包括噬菌體展示、使用報告酶的生物測定和單孔測定。

總結(jié)

蛋白質(zhì)工程是一個相對較新的研究領(lǐng)域，越來越多地用于制造具有各種功能特性的定制蛋白質(zhì)，用于藥物設(shè)計等目的。  分析大型工程蛋白質(zhì)庫的需要促進了該領(lǐng)域高通量方法的使用。   流式細胞術(shù)就是這樣一種技術(shù)，已顯示出實現(xiàn)這一要求的潛力，可在短時間內(nèi)提供研究所需的數(shù)據(jù)。

蛋白組/代謝組實驗

? iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學

? Label Free 實驗檢測服務(wù)

? LC-MS/MS 蛋白質(zhì)譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質(zhì)
? 廣泛靶向代謝組學

蛋白/核酸相互作用實驗

? GST pull down

? RNA pull down

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯(lián)親和純化

分子細胞生物學實驗

? 基因調(diào)取/合成 (cDNA克隆)

? 熒光定量PCR (qPCR)

? 載體構(gòu)建實驗服務(wù)

? miRNA靶基因驗證
? 慢病毒包裝

科研產(chǎn)品

? 哺乳動物細胞表達載體

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務(wù)

? 單克隆抗體測序

? 抗體從頭測序

? 抗體表達服務(wù)

? 重組抗體表達

實驗試劑盒

? RNA pull down 試劑盒

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒

輝駿實力